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        了解ELISA實驗常見的封閉劑

        來源: 上海西格生物科技有限公司 >> 進入該公司展臺 2022/05/16 16:10:56 已瀏覽:
        導讀:了解ELISA實驗常見的封閉劑


        elisa實驗常見的封閉劑是:BSA(牛血清白蛋白)、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠和Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液PBST或者TBST。


        1、SA是常用的封閉劑,成分單一適用于大多數情況。若免疫原是偶聯BSA的, BSA有很強的免疫原性,會導致產生很多的針對BSA的抗體,為避免交叉反應,不能用BSA、脫脂奶粉等封閉,可以選用酪蛋白或無蛋白的封閉劑封閉。大部分BSA中有少量的抗體殘留,會導致抗原/抗體之間的交叉反應,產生高背景,雜帶較多或使得本底水平增高。


        2、封閉血清的原理主要有兩點,一是待檢樣本會有些與蛋白非特異性結合的物質,從而導致背景過高,因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結合,從這點看,BSA和血清沒有明顯區別。二是待檢樣本中可能會有Fc受體,可以和抗體恒定區結合,與抗體特異性無關,封閉血清中有抗體,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結合。BSA則無法封閉Fc受體。


        3.脫脂奶粉的優點是價錢便宜,但是由于成分相對復雜,以適用范圍要狹窄一些。磷酸化抗體也許會導致背景增加,此外,因為自身含有,不能用于標記的抗體系統。


        4、酪蛋白 和BSA作用類似,普通酪蛋白不易溶解。中性和堿性條件下帶有負電性,與同樣帶負電荷膠體金之間存在排斥力,而膜一般都是帶正電荷,會與酪蛋白有一定的吸附作用,用酪蛋白封閉效果好些。


        5、無蛋白化合物  甲醛:與PVDF膜表面的微結構反應或者結合,使之失去結合蛋白的疏水力或者空間結構域。去污劑(吐溫-20):Tween-20是一種非離子型去污劑,有復性抗原的作用,與膜疏水性吸附,有很強的對非特異性吸附的洗脫作用,同樣可以降低蛋白間的疏水作用,可提高特異性的識別能力。




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